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    麻痹性毒素檢測試劑盒(過敏毒素)

    簡要描述:

    Paralytic shellfish poison PSP競爭酶免疫分析法定量檢測肉樣中的麻痹性毒素。試劑盒中包括了所有檢測用的試劑。該試劑盒有48個試驗孔包括標準試驗。如果進行定量分析,必需有微孔板酶標儀。

    更新時間:2023-08-05

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    麻痹性毒素檢測試劑盒(過敏毒素)

    訂貨號: R1902
    產品名稱: 麻痹毒素檢測
    產品英文名稱: FAST Saxitoxin
    包裝: 48次檢測
    產品介紹: 如下
    產品說明:

    酶聯免疫分析法,用于定量檢測貝類中的麻痹毒素以及相關毒素。檢測限50ppb,孵育時間30分鐘

    麻痹性毒素檢測試劑盒

    Paralytic shellfish poison  PSP

    酶標免疫分析定量檢測麻痹性毒素試劑盒。德國R-Biopharm制造(中文翻譯件僅供參考,以試劑盒內附的英文原件為準)。

    Paralytic shellfish poison  PSP 產品編號:R1902

    Paralytic shellfish poison  PSP競爭酶免疫分析法定量檢測肉樣中的麻痹性毒素。試劑盒中包括了所有檢測用的試劑。該試劑盒有48個試驗孔包括標準試驗。如果進行定量分析,必需有微孔板酶標儀。

    樣品處理     清洗,勻漿,10%鹽酸煮沸,離心

    樣品處理時間

    樣品處理(10個樣品).………………….大約1.5小時

    測試時間(與樣品數量無關).…………………1.0小時

    檢測限  麻痹性毒素.………………………………50ppb

    回收率   …………………….…………………大約90%

    交叉反應

    Paralytic shellfish poison PSP.………………….………100%

    Decarbamoyl PSP.……………………………….………20%

    Gonyautoxine Ⅱ,Ⅲ.………………….………………70%

    Neo PSP………………….……….………………….……12%

    1. 用途

    Paralytic shellfish poison PSP采用競爭酶免疫分析法定量分析貝類產品中的麻痹性毒素。

    2.  概要

    麻痹性毒素(PSP)是在多種水藻產生的潛在的神經毒素,通過食物鏈累積在貝類中。麻痹性毒素(PSP)引起呼吸麻痹,導致8 %的病例死亡,阻滯神經和肌肉隔膜的鈉離子通道。致死量是1-3mg,在食入0.5-1.0µg的麻痹性毒素(PSP)臨床表現麻木和呼吸障礙。

    直到現在檢測海藻毒素(貝類毒素)的方法,一直是小鼠活體實驗,這種方法的局限性是結果的高變異性和低敏感性(近

    似值370ppb,37µgPSP/100g樣品),這種低靈敏度的方法使歐盟各成員國不得不分別給出了40µg-80µgPSP/100g樣品這樣特別有問題的允許限。此外,從動物保護觀點看,這種方法也將引起很大的爭議。

    使用RIDASCREEN FAST PSP檢測試劑盒能提供快速而準確的分析。

    3. 測定原理

    測定的基礎是抗原抗體反應,微孔板包被有針對麻痹性毒素(PSP)抗體的捕捉抗體,加入標準或樣品溶液及麻痹性毒素(PSP)酶標記物,游離麻痹性毒素(PSP)與麻痹性毒素(PSP)酶標記物競爭麻痹性毒素(PSP)抗體,同時麻痹性毒素(PSP)抗體與捕捉抗體連接。沒有結合的酶標記物在洗滌步驟中被除去。將酶基質(過氧化尿素)和發色劑(四甲基聯苯胺)加入到孔中并且孵育。結合的酶標記物將無色的發色劑轉化為藍色的產物。加入反應停止液后使顏色由藍轉變為黃色。在450nm測量,吸光強度與樣品中的濃度成反比。

        

    4. 提供的試劑

    每一個盒中的試劑足夠進行48個測量(包括標準分析孔),盒中的材料如下

    1× 48孔板(6條 ×  8孔)包被有針對麻痹性毒素(PSP)抗體的捕捉抗體。

    6×麻痹性毒素(PSP)標準液,1.3 ml/瓶,標準液濃度為

    0ppb,2.5ppb,5ppb,10ppb,20ppb,40ppb 直接應用

    1× 酶標記物濃縮液(0.3ml.………………….………紅色帽

    1× 抗體濃縮液(0.3ml.……………………….………黑色帽

    1× 基質/發色劑(6ml.………………….……………白色滴瓶

    1× 反應停止液1N硫酸(6ml).……………….………黃色滴瓶

    1× 緩沖液(50ml

    用于樣品,酶標記物及抗體的稀釋

     

    5.  需要的材料但盒中不提供

    5.1設備

    ----微孔板酶標儀450nm)定量分析用

    ----離心機

    ----均質器

    ----磁攪拌器

    ----刻度移液管

    ----50µl,100µl,500µl微量加樣器

    5.2 試劑

    ----0.1M  HCl

    6.  操作者應該注意之事項

    ----標準液含有麻痹性毒素(PSP),應特別小心,避免接觸

    ----反應停止液為1N硫酸,避免接觸皮膚

    ----不要使用過了有效日期的試劑盒,稀釋或攙雜使用會引起    靈敏度的降低

    ----不要交換使用不同批號的盒中試劑

    7.  儲存條件

    ----保存試劑盒于2-80C。不要冷凍。

    ----無色的發色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下

    ----將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑    一起重新密封

    8試劑變質的跡象

    微紅色的發色試劑有任何蘭顏色產生,表明發色劑變質,應當棄之。

    0標準的吸光度值小于0.6個單位 (A450nm<0.6)時,表示試劑可能變質。

    9.  樣品處理 

    樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存

    ----除去貝殼,用雙蒸水洗凈貝肉后均質器均質

    ----稱取10g 均質后的樣品加入10ml 0.1 M的 HCl(如果樣品為較干燥的貝肉,請加入20ml 0.1M 的HCl,稀釋系數等同,煮沸并攪拌5分鐘

    ----離心:4℃下,3500g離心10分鐘(離心后可能有懸濁,不影響結果)

    ----離心后控制pH值,用5N的鹽酸調節到4.0以下

    ----取100µl上清液,用樣品稀釋緩沖液(1:10)稀釋(1+9

    ----取50µl用試劑盒進行分析,此時的稀釋倍數是20

    高濃度的樣品,如超出標準曲線范圍,進一步用樣品稀釋液1:10稀釋(1+9),稀釋系數為200

    10. 酶標免疫分析程序

    10.1測定之前注意事項

    1. 使用之前將所有試劑回升至室溫22-25℃。

    2. 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。

    3. 在使用中不要讓微孔干燥。

    4. 在EIA分析中的再現性,很大程度上取決于洗板的*性,仔細按照推薦的洗板順序操作是EIA測定程序中的要點。

    5. 在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋子蓋住微孔板。

    10.2 酶標記物

    提供的酶標記物(蓋紅色帽的瓶子)為濃縮液。由于稀釋的酶標記物穩定性不好,所以只稀釋實際需用量的酶標記物。 在吸取濃縮液之前,要仔細地輕輕振搖。用緩沖液以1: 11的比例稀釋酶標記物濃縮液(200µl濃縮液+2ml緩沖液,足夠4個微孔板條用)。

    10.3 抗體

    提供的抗體 (蓋黑色帽的瓶子)為濃縮液。由于稀釋的抗體穩定性不好,所以只稀釋實際需用量的抗體。在吸取濃縮液之前,要仔細地輕輕振搖。用緩沖液以1: 11的比例稀釋抗體濃縮液(200µl濃縮液+2ml緩沖液,足夠4個微孔板條用)

    10.4包被有抗體的微孔板條

    將錫箔袋回至室溫后,沿橫向邊壓封線外側剪開,取出需用數量的微孔板及框架, 將不用的微孔板立即放回原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2-8℃。不要冷凍。

    10.5測定程序  (在20-25℃條件下操作)

    1. 將足夠標準和樣品所用數量的孔條插入微孔架,標準及樣品做平行,并記錄標準及樣品的位置。

    2. 加入50µl的標準或處理好的樣品到各自的微孔中,每個標準和樣品必須使用新的吸頭。

    3. 加入50µl稀釋的酶標記物到微孔底部(紅色蓋),輕輕混合。

    4. 加入50µl稀釋的抗體到微孔底部(黑色蓋),*混合,并且在室溫孵育15分鐘,覆蓋上薄膜(防止蒸發)。如果實驗所用孔數量多,請用多通道移液器。(注意移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體,避免交叉污染。)

    5. 倒出孔中的液體, 將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證*除去孔中的液體。用洗瓶或多通道移液器將250µl蒸餾水加入孔中。再次倒出孔中的液體,*除去孔中的液體,再重復操作洗滌步驟兩次以上。(移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體,避免污染洗滌用水造成洗板不*。洗板后要立即進行下一步操作,避免板孔干躁造成重復性差)

    6. 加入 2滴(100µl)基質/發色試劑到微孔中(白色滴瓶), 輕輕震蕩并在室溫暗處孵育15分鐘。(注意此操作步驟要快,盡量保持前后孔孵育時間的*,如果實驗所用孔數量多,請用多通道移液器加液。移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體。)

    7. 加入 2滴(100µl)反應停止液到微孔中,(注意此操作步驟要快,如果實驗所用孔數量多,請用多通道移液器加液。)混合好在450nm處測量吸光度值,必須在加入停止液后10分鐘內讀取光度值。

    11.  結果

    定量分析:所獲得的標準和樣品吸光度值除以*個標準0標準) 的吸光度值再乘以100。因此0標準等于100%并且以百分比給出吸光度值。

    標準的吸光度值(或樣品)

    -------------------------------× 100=   % 吸光度值

    0標準的吸光度值

    計算的標準值繪成為一個對應麻痹性毒素 (PSP)濃度(µg/kg)的半對數坐標系統曲線圖,相對應每一個樣品的濃度(µg/kg)可以從標準曲線上讀出。

    請注意

    為了獲得樣品中的麻痹性毒素(PSP)的實際濃度(µg/kg),從標準曲線上讀出的濃度值必須乘以相對應的稀釋系數。當樣品處理過程是按指示進行的,稀釋系數為20,又一次稀釋后系數為200。

    12靈敏度

    靈敏度為2.5ppb(µg/kg),根據樣品處理稀釋系數,檢測下限為50ppb(µg/kg)

    13特異性

    RIDASCREEN FASTPSP(麻痹性毒素快速)試劑盒的特異性如下

    Paralytic shellfish poison PSP.………………….………100%

    Decarbamoyl PSP.……………………………….………20%

    Gonyautoxine Ⅱ,Ⅲ.………………….………………70%

    Neo PSP………………….……….………………….……12%

    14. 重復性

    15.  回收率

    添加回收實驗:貝肉…………………………….……約90%

    16. 參考文獻   見試劑盒中提供的英文原版說明書

    17. 完成實驗的關鍵注意點

    1. 按要求將所有試劑回升至室溫22-25℃,測量實驗臺面的溫度為22-25℃。

    2. 稀釋酶標記物及抗體時,先移取緩沖液后移取被稀釋物,避免稀釋緩沖液被污染(注意換新吸頭、移取前混均、稀釋后混均)。不要使用塑料容器。

    3. 將錫箔袋回至室溫后,沿橫向邊壓封線外側剪開,取出需用數量的微孔板及框架, 將不用的微孔板立即放回原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2-8℃。不要冷凍。

    4. 洗微孔板時移液器管尖千萬不要進入微孔板孔中,不要接觸到放進孔中的液體,避免污染洗滌用水造成洗板不*。

    5. 實驗完畢后,如果容器再次使用,請認真洗凈容器,不要造成容器的交叉污染,特別是不要將盛裝過標準溶液的容器與其它容器同時洗滌(丟棄)。

    所有吸頭應該一次性使用,要使用高品質的吸頭。

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